Biofilm production of Pseudomonas spp. isolates from canine otitis in three different enrichment broths

Vet Dermatol. 2019 Jun;30(3):218-e67. doi: 10.1111/vde.12738. Epub 2019 Mar 21.

Abstract

Background: Pseudomonas spp. are commonly isolated from dogs with clinical otitis and have been shown to produce biofilm. There is a paucity of studies demonstrating biofilm growth in veterinary medicine.

Hypothesis/objectives: To compare biofilm production of Pseudomonas spp. isolated from dogs with otitis using three different enrichment broths at two different time points. Speciation was performed.

Animals: One hundred isolates from 98 dogs with clinical otitis were assessed for biofilm production.

Methods and materials: One hundred isolates were assessed for biofilm production using a microtitre plate assay. Biofilm production in Luria-Bertani Broth (LBB), Mueller-Hinton Broth (MHB) and Tryptic Soy Broth (TSB) were assessed after 18 and 24 h of incubation.

Results: At 18 h, biofilm production was demonstrated in 87% of LBB, 91% of TSB and 93% of MHB grown isolates. By 24 h, this was 92% of LBB, 96% of TSB and 99% of MHB isolates. Biofilm production was significantly increased after 24 h incubation compared to 18 h. A significant difference was noted in biofilm production between LBB and MHB (P = 0.0349), but not between LBB and TSB (P = 0.3727) or MHB and TSB (P = 0.3687) at 24 h incubation. Two isolates were speciated as P. fluorescens and 98 as P. aeruginosa.

Conclusion and clinical importance: Not all enrichment broths were equivalent to one another and 24 h incubation was superior to 18 h. Biofilm production was high in this population of Pseudomonas spp. isolates.

Contexte: Les Pseudomonas spp. sont fréquemment isolés de chiens atteints d'otite clinique et sont capables de produire du biofilm. Il y a peut d’étude montrant la croissance de biofilm en médecine vétérinaire. HYPOTHÈSES/OBJECTIFS: Comparer la production de biofilm par des Pseudomonas spp. isolés de chiens avec otite à l'aide de trois milieux différemment enrichis à deux moments distincts. Une spéciation a été réalisée.

Sujets: Cent souches de 98 animaux avec otite clinique ont été évaluées pour la production de biofilm. MATÉRIEL ET MÉTHODE: Cent souches ont été testées pour la production de biofilm à l'aide de plaques de microtitration. La production de biofilm a été évaluée après 18 et 24h d'incubation dans LBB (Luria-Bertani Broth), MHB (Mueller-Hinton Broth) et TSB (Tryptic Soy Broth). RÉSULTATS: A 18h, une production de biofilm a été montrée à 87% sur LBB, 91% sur TSB et 93% sur MHB. A 24h, il y avait 92% sur LBB, 96% sur TSB et 99% sur MHB des souches. La production de biofilm a augmenté significativement après une incubation de 24h par rapport à 18h. Une différence significative a été notée dans la production de biofilm entre LBB et MHB (P = 0.0349), mais pas entre LBB et TSB (P = 0.3727) ou MHB et TSB (P = 0.3687) à 24 h d'incubation. Des souches ont été spéciées comme P. fluorescens et 98 comme P. aeruginosa.

Conclusion et importance clinique: Tous les milieux n’étaient pas équivalents et une incubation de 24h était supérieure à 18h. La présence d'un biofilm est fréquente dans les otites à Pseudomonas spp.

INTRODUCCIÓN: Pseudomonas spp. comúnmente se aíslan de perros con otitis clínica y se ha demostrado que producen biomembranas. Hay una escasez de estudios que demuestren el crecimiento de biomembranas en medicina veterinaria. HIPÓTESIS/OBJETIVOS: comparar la producción de biomembranas de Pseudomonas spp. aisladas de perros con otitis utilizando tres caldos de enriquecimiento diferentes en dos puntos temporales diferentes. Se realizó especiación. ANIMALES: se evaluó la producción de biomembranas de cien aislados obtenidos de 98 animales con otitis clínica. MÉTODOS Y MATERIALES: se evaluaron cien aislamientos para la producción de biomembranas utilizando un ensayo de placa de microtitulación. La producción de biomembranas en caldo Luria-Bertani (LBB), caldo Mueller-Hinton (MHB) y caldo tríptico de soja (TSB) se evaluó después de 18 y 24 h de incubación. RESULTADOS: a las 18 h, se demostró la producción de biomembranas en el 87% de cultivos en LBB, el 91% en TSB y el 93% de los aislados en MHB. A las 24 h, estos resultados fueron 92% en LBB, 96% en TSB y 99% en aislamientos en MHB. La producción de biomembranas aumentó significativamente después de 24 h de incubación en comparación con 18 h. Se observó una diferencia significativa en la producción de biomembranas entre LBB y MHB (P = 0,0349), pero no entre LBB y TSB (P = 0,3727) o MHB y TSB (P = 0,3687) a las 24 h de incubación. Se identificaron dos aislados como P. fluorescens y 98 como P. aeruginosa. CONCLUSIÓN E IMPORTANCIA CLÍNICA: no todos los caldos de enriquecimiento fueron equivalentes entre sí y las 24 h de incubación fueron superiores a las 18 h. La presencia de un biomembranas es probable para Pseudomonas spp. aisladas de casos de otitis.

Hintergrund: Pseudomonas spp. werden häufig bei Hunden mit einer klinischen Otitis isoliert. Es konnte gezeigt werden, dass sie einen Biofilm produzieren. Es gibt nur wenige Studien, die das Wachstum des Biofilms in der Veterinärmedizin dokumentieren.

Hypothese/ziele: Ein Vergleich der Biofilmproduktion von Pseudomonas spp., welcher bei Hunden mit einer Otitis isoliert wurde mittels dreier verschiedener Anreicherungsbouillons zu zwei verschiedenen Zeitpunkten. Es wurde eine Speziesbestimmung durchgeführt.

Tiere: Es wurden einhundert Isolate von 98 Tieren mit einer klinischen Otitis auf Biofilmproduktion untersucht.

Methoden und materialien: Einhundert Isolate wurde auf Biofilmproduktion mittels Mikrotiterplattenassay untersucht. Es wurde die Biofilmproduktion in Luria-Bertani Bouillon (LBB), in Mueller-Hinton Bouillon (MHB) und Tryptischer Sojabouillon (TSB) nach einer 18- und 24-stündigen Inkubation beurteilt.

Ergebnisse: Nach 18h konnte eine Biofilmproduktion in 87% der in LBB gewachsenen Isolate, in 91% der in TSB gewachsenen Isolate und in 93% der in MHB gewachsenen Isolate gezeigt werden. Nach 24h war dies bei 92% der Isolate in LBB, 96% der Isolate in TSB und 99% der Isolate in MHB der Fall. Die Biofilmproduktion war nach 24h Inkubation im Vergleich zu einer 18-stündigen Inkubation signifikant erhöht. Nach 24-stündiger Inkubation wurde ein signifikanter Unterschied bei der Biofilmproduktion zwischen LBB und MHB (P = 0,0349), aber nicht zwischen LBB und TSB (P = 0,3727) oder MHB und TSB (P = 0,3687) festgestellt. Zwei Isolate wurden als P. fluorescens und 98 als P. aeruginosa identifiziert.

Schlussfolgerung und klinische bedeutung: Nicht alle Anreicherungsbouillons waren gleichwertig und eine 24-stündige war besser als eine 18-stündige Inkubationsdauer. Das Auftreten von Biofilm ist bei Pseudomonas spp. Isolaten aus dem Ohr sehr wahrscheinlich.

Contexto: Pseudomonas spp são comumente isoladas em cães com otite e têm demonstrado ser produtoras de biofilme. Há uma escassez de estudos demonstrando o crescimento de biofilme em medicina veterinária. HIPÓTESE/OBJETIVOS: Comparar a produção de biofilme de Pseudomonas spp isoladas de cães com otite utilizando três meios de cultura em caldo diferentes em tempos distintos. Realizou-se especiação.

Animais: Cem isolados de 98 animais com otite foram avaliados para a produção de biofilme. MÉTODOS E MATERIAIS: Os cem isolados foram avaliados para a produção de biofilme utilizando um ensaio em placa de microtitulação. Avaliou-se a produção de biofilme em caldo de Luria-Bertani (LBB), caldo Mueller-Hinton (MHB) e caldo de soja tríptica (TSB) após 18 e 24 horas de incubação.

Resultados: Após 18 horas, a produção de biofilme foi demonstrada em 87% dos isolados em LBB, 91% em TSB e 93% em MHB. A produção de biofilme foi significativamente maior após 24 horas de incubação, comparado a 18 horas. Observou-se uma diferença significativa na produção de biofilme entre LBB e MHB (P = 0.0349), mas não entre LBB e TSB (P = 0.3727) ou MHB e TSB (P = 0.3687) após 24 horas de incubação. Dois isolados foram especiados como P. fluorescens e 98 as P. aeruginosa. CONCLUSÕES E IMPORTÂNCIA CLÍNICA: Nem todos os meios de cultura em caldo foram equivalentes entre si e o tempo de incubação de 24 horas foi superior a 18 horas. É provável a presença de biofilme em isolados auriculares de Pseudomonas spp.

背景: シュードモナス属菌は臨床的に中耳炎を有する犬から一般的に分離され、バイオフィルムを形成することが明らかにされている。獣医学においてバイオフィルムの発達を実証する研究は不足している。 仮説/目的: 本研究の目的は、異なる2時点において3つの異なる濃縮ブロスを用いて中耳炎を有する犬から分離したシュードモナス属菌のバイオフィルム生成能を比較することである。さらにスペシエーションを実施した。 被験動物: 臨床的に中耳炎を有する98頭の動物から採取された100分離株に対し、バイオフィルム産生能について評価した。 方法および材料: マイクロタイタープレートアッセイを用いて100株をバイオフィルム産生能について評価した。 Luria-Bertani Broth(LBB)、Mueller-Hinton Broth(MHB)およびTryptic Soy Broth(TSB)においてバイオフィルム産生能を、培養18および24時間後に評価した。 結果: 培養後18時間の時点で、87%のLBB、91%のTSB、および93%のMHB増殖分離株がバイオフィルム産生を示した。 24時間までに、92%のLBB、96%のTSBおよび99%のMHB分離株がバイオフィルムを産生した。バイオフィルム産生は、18時間と比較して24時間培養後に有意に増加した。 24時間培養で、LBBとMHB間にバイオフィルム産生に有意差が見られた(P = 0.0349)が、LBBとTSB間(P = 0.3727)またはMHBとTSB間(P = 0.3687)では見られなかった。分離株のうち2株をP. fluorescens、98株をP. aeruginosaとして分類した。 結論と臨床的重要性: すべての濃縮ブロスが互いに同等ではなく、24時間培養が18時間より優れていた。バイオフィルムは、耳におけるシュードモナス属株に存在しそうである。.

背景: 临床中,经常能从耳炎患犬的耳道中分离出有生物膜的假单胞菌。但很少有研究阐明兽医学中生物膜的生长。 假设/目标: 从耳炎患犬分离出来假单胞菌,分别使用三种不同的富集液培养,比较两个不同时间点的生物膜形成,并进行形态分析。 动物: 评估采自98只耳炎动物的一百个菌株形成的生物膜。 方法和材料: 使用微量滴定板测定法评估一百个菌株形成的生物膜。分别在Luria-Bertani肉汤(LBB)、Mueller-Hinton肉汤(MHB)和Tryptic Soy肉汤(TSB)中培养18和24小时,随后对生物膜的形成进行评估。 结果: 培养18小时后,87%的LBB、91%的TSB和93%的MHB培养的菌株形成了生物膜;培养24小时后,92%的LBB、96%的TSB和99%的MHB分离株有生物膜的形成。与18小时相比,培养24小时后的生物膜形成显著增加。LBB与MHB的生物膜形成有显著差异(P = 0.0349),但在培养24小时后,LBB和TSB(P = 0.3727)或MHB和TSB(P = 0.3687)之间无显著差异。两种菌株被鉴定为荧光假单胞菌,而98株为铜绿假单胞菌。 结论和临床价值: 并非所有富集液彼此一致,但培养24小时优于18小时。耳道假单胞菌菌株很可能形成生物膜。.

Publication types

  • Comparative Study

MeSH terms

  • Animals
  • Biofilms / growth & development*
  • Caseins / chemistry
  • Culture Media / chemistry*
  • Dogs
  • Microbial Sensitivity Tests
  • Otitis / microbiology*
  • Protein Hydrolysates / chemistry
  • Pseudomonas / growth & development*

Substances

  • Caseins
  • Culture Media
  • Protein Hydrolysates
  • trypticase-soy broth