Objective: This study aimed to identify the larval form of Eustrongylides sp. isolated from the visceral organs of Channa punctata (Bloch, 1793) using morphological and molecular methods.
Methods: Fishes were collected from fish farms in Nadia and North 24 Paraganas for the collection of nematodes. The visceral organs were dissected and kept in 0.67% normal saline. Nematodes collected from the abdominal regions and visceral organs for light microscopy study were fixed in 70% ethanol. Morphological features were studied by placing the nematodes in lactophenol. The specimens were later preserved in 70% ethanol containing 5% glycerine. Specimens processed for scanning electron microscopy were fixed in 2.5% glutaraldehyde and postfixed in 1% osmium tetraoxide. Proper identification was done by using standard methology. Molecular studies were performed for the 18S rRNA, ITS1, 5.8S rRNA, ITS2 and 28S rRNA gene fragments using polymerase chain reaction amplification, sequencing and phylogenetic analysis.
Results: The morphological characteristics of nematodes were described with the help of light and scanning electron microscopy. Additional features not described earlier like dimensions and shape of the cephalic papillae, absence of somatic papillae, presence of caudal papillae, were identified for the first time. Moreover, molecular studies with ITS regions further confirmed the identification of the nematode.
Conclusion: Thus the use of morphotaxonomy along with molecular techniques would help in proper identification of Eustrongylides sp infecting edible fish. Studies on the nematode would help toexplore the intermediate as well as paratenic hosts of the parasite. Data in this regard would contribute significantly to the fish database in regard to parasites infesting edible fishes.
Amaç: Bu çalışmanın amacı, Channa punktata’nın (Bloch, 1793) visseral organlarından izole edilen Eustrongylides sp.’nin larva formunun morfolojik ve moleküler yöntemlerle belirlenmesidir.
Yöntemler: Balıklar, nematodların toplanması için Nadia ve Kuzey 24 Paraganas’taki balık çiftliklerinden toplandı. İç organlar diseke edildi ve %0,67 normal salin içinde tutuldu. Işık mikroskobu çalışması için karın bölgelerinden ve iç organlardan toplanan nematodlar, %70 etanol içinde sabitlendi. Nematodlar laktofenol içerisine yerleştirilerek morfolojik özellikleri incelendi. Numuneler daha sonra %5 gliserin içeren %70 etanol içinde muhafaza edildi. Taramalı elektron mikroskobu için işlenen numuneler %2,5 glutaraldehit içinde ve daha sonar %1 osmiyum tetraoksit içinde sabitlendi. Standart metodoloji kullanılarak uygun tanımlama yapıldı. 18S rRNA, ITS1, 5.8S rRNA, ITS2 ve 28S rRNA gen fragmanı için polimeraz zincir reaksiyon amplifikasyonu ve dizileme kullanılarak moleküler çalışmalar ve filogenetik analiz yapıldı.
Bulgular: Nematodların morfolojik özellikleri ışık ve taramalı elektron mikroskobu yardımıyla yeniden tanımlanmıştır. Sefalik papillaların boyutları ve şekli, somatik papillaların yokluğu, kaudal papillaların varlığı gibi daha önce tanımlanmayan ek özellikler ilk kez tanımlanmıştır. Ayrıca, ITS bölgeleriyle yapılan moleküler çalışmalar, nematodun tanımını daha da doğrulamıştır.
Sonuç: Moleküler tekniklerle birlikte morfotaksonominin kullanılması, yenilebilir balıkları enfekte eden Eustrongylides sp.’nin doğru tanımlanmasına yardımcı olacaktır. Nematod üzerinde yapılan çalışmalar, parazitin ara ve paratenik konaklarının araştırılmasına yardımcı olacaktır. Bu bağlamdaki veriler, yenilebilir balıkları istila eden parazitlerle ilgili olarak balık veritabanına önemli ölçüde katkıda bulunacaktır.
Keywords: Channa punctata; Eustrongylides sp.; scanning electron microscopy; taxonomy; molecular identification.