In this study the tonB2 gene was cloned from Actinobacillus pleuropneumoniae JL01 (serovar 1) and expressed as a glutathione-S-transferase (GST) fusion protein in Escherichia coli BL21(DE3). The GST fusion protein was recognized by antibodies in serum positive for A. pleuropneumoniae by Western blot analysis. Purified soluble GST-TonB2 was assessed for its ability to protect BALB/c mice against A. pleuropneumoniae infection. Mice were vaccinated with GST-TonB2 subcutaneously and challenged intraperitoneally with either ~4.0 × 10(5) colony-forming units (CFU) or ~1.0 × 10(6) CFU of A. pleuropneumoniae 4074. They were examined daily for 7 d after challenge. The survival rate of the TonB2-vaccinated mice was significant higher than that of the mice given recombinant GST or adjuvant alone. These results demonstrate that A. pleuropneumoniae TonB2 is immunogenic in mice and should be further assessed as a potential candidate for a vaccine against A. pleuropneumoniae infection. In addition, an indirect enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) based on the GST-TonB2 recombinant protein was developed. Compared with the ApxIVA ELISA, the TonB2 ELISA provided earlier detection of antibodies in pigs at various times after vaccination with A. pleuropneumoniae live attenuated vaccine. When compared with an indirect hemagglutination test, the sensitivity and specificity of the TonB2 ELISA were 95% and 88%, respectively. The TonB2 ELISA provides an alternative method for rapid serologic diagnosis of A. pleuropneumoniae infection through antibody screening, which would be especially useful when the infection status or serovar is unknown.
Dans la présente étude le gène tonB2 a été cloné à partir d’Actinobacillus pleuropneumoniae JL01 (sérovar 1) et exprimé en tant que protéine de fusion de la glutathione-S-transférase (GST) dans la souche BL21(DE3) d’Escherichia coli. La protéine de fusion GST a été reconnue par les anticorps dans les sérums positifs pour A. pleuropneumoniae par analyse par immunobuvardage. Le complexe GST-TonB2 a été évalué pour sa capacité à protéger les souris BALB/c contre une infection par A. pleuropneumoniae. Les souris ont été vaccinées avec GST-TonB2 par voie sous-cutanée et inoculées par voie intra-péritonéale avec ~4,0 × 105 unités formatrices de colonies (UFC) ou ~1,0 × 106 UFC d’A. pleuropneumoniae 4074. Elles ont été examinées quotidiennement pendant 7 j après l’infection défi. Le taux de survie des souris TonB2 vaccinées était significativement plus élevé que celui des souris qui avaient reçu uniquement la GST recombinante ou l’adjuvant. Les résultats ont démontré que TonB2 d’A. pleuropneumoniae est immunogène chez les souris et devrait être évalué de manière plus approfondie comme candidat potentiel pour un vaccin contre l’infection par A. pleuropneumoniae. De plus, une épreuve immuno-enzymatique (ELISA) utilisant la protéine recombinante GST-TonB2 a été développée. Comparativement à un ELISA utilisant ApxIVA, l’ELISA TonB2 a permis une détection plus rapide des anticorps chez les porcs à différents temps après la vaccination contre A. pleuropneumoniae à l’aide d’un vaccin vivant atténué. Lorsque comparé à une épreuve d’hémagglutiantion indirecte, la sensibilité et la spécificité de l’ELISA TonB2 étaient respectivement de 95 % et 88 %. L’ELISA TonB2 fournit une méthode alternative rapide pour le diagnostic sérologique d’infection par A. pleuropneumoniae au moyen d’une méthode de tamisage des anticorps, ce qui serait spécialement utile lorsque le statut de l’infection ou le sérovar infectant sont inconnus.
(Traduit par Docteur Serge Messier)