An optimized protocol was developed for the simultaneous detection and differentiation of Haemophilus parasuis, Streptococcus suis, and Mycoplasma hyorhinis in formalin-fixed, paraffin-embedded (FFPE) tissues with multiplex nested polymerase chain reaction (PCR). This method also determines the prevalence of these bacteria in pigs with polyserositis. DNA extraction with a combination of a commercial reagent and proteinase K resulted in more frequent detection of the pathogens than DNA extraction with proteinase K alone. Among FFPE tissue samples from 312 cases of polyserositis in which at least 1 bacterial species was detected, multiplex nested PCR detected H. parasuis in 239 (77%), S. suis in 124 (40%), and M. hyorhinis in 40 (13%). The disease was caused by a single pathogen in 224 (72%) of the cases and multiple pathogens in 88 (28%). Among the pigs positive for H. parasuis, S. suis, and M. hyorhinis by multiplex nested PCR, the pathogen was isolated from only 11%, 35%, and 28%, respectively. Therefore, the PCR protocol developed in this study is a useful diagnostic method when samples are negative after isolation methods and even for samples in which only 1 pathogen was isolated.
Un protocole optimisé de réaction d’amplification en chaîne par la polymérase multiplex nichée pour la détection simultanée et la différentiation d’Haemophilus parasuis, Streptococcus suis et Mycoplasma hyorhinis dans des tissus fixés dans la formaline, enrobés dans la paraffine (FFPE) a été développé. Cette méthode a permis également de déterminer la prévalence de ces bactéries chez des porcs avec polysérosite. L’extraction de l’ADN par une combinaison de réactifs commerciaux et de protéinase K a permis une détection plus fréquente des agents pathogènes que l’extraction de l’ADN avec uniquement la protéinase K. Parmi les échantillons de tissus FFPE provenant de 312 cas de polysérosite dans lesquels au moins une des espèces bactériennes fut détectée, le PCR multiplex niché a détecté H. parasuis dans 239 (77 %), S suis dans 124 (40 %) et M. hyorhinis dans 40 (13 %). La condition pathologique était causée par un seul agent pathogène dans 224 cas (72 %) et par des agents multiples dans 88 cas (28 %). Parmi les porcs positifs pour H. parasuis, S. suis et M. hyorhinis par PCR multiplex niché, l’agent pathogène n’a été isolé respectivement que de seulement 11 %, 35 % et 28 %. Ainsi, le protocole PCR développé dans la présente étude est une méthode diagnostique utile lorsque les échantillons s’avèrent négatifs lors de la culture et aussi pour les échantillons à partir desquels un seul agent pathogène est isolé.
(Traduit par Docteur Serge Messier)