Background: To examine human microRNA expression in fertile men and subsequently to compare expression patterns of miRNAs in fertile and infertile men, specifically men with Sertoli Cell Only (SCO) histopathology.
Methods: Testicular tissues from men with azoospermia and SCO, as well as those of men with normal spermatogenesis, were analyzed. MicroRNA was isolated using the miRCURY™ RNA Purification Kit. A miRCURY LNA™ Universal RT system was used for detection of microRNA by quantitative real-time PCR. MicroRNA localization was performed by in situ hybridizations (ISH) on formalin-fixed paraffin embedded (FFPE) tissue utilizing miRCURY LNA™ microRNA ISH technology. Statistical analysis was performed by GenEx V5.0.
Results: MicroRNA expression was determined for 13 normal fertile men and 5 men with the confirmed diagnosis of diffuse SCO. MiR-202-5p expression was reduced by 17-fold (P < 0.00001) in tissue from SCO men compared to normal. MiR-34c-5p was reduced by 346-fold (P < 0.00001), miR-10b was reduced 18-fold (P < 0.00001), miR-191 was reduced 20-fold (P = 0.001) and miR-126 was reduced 40-fold (P < 0.00001)) in tissues from SCO compared to normal fertile men. Using ISH, miR-202-5p was localized to Sertoli cells of men with normal spermatogenesis, but not in the Sertoli cells of men with SCO.
Conclusion: Number of miRNAs are differentially expressed in normal fertile men compared to men with SCO. MicroRNA-202-5p is localized to Sertoli cells and its expression dramatically differs between fertile men and men whose germ cells are depleted, suggesting a novel interaction for regulating microRNA expression between the somatic and germ cell components of the seminiferous epithelium.
Objectifs: Evaluer l’expression des microARN chez des hommes féconds puis comparer les profils d’expression de ces miRNAs chez des hommes féconds et des inféconds qui présentent plus particulièrement un syndrome de Sertoli seules (SCO) à l’histologie testiculaire.
Matériel et méthodes: Ont été analysés des tissues testiculaires d’hommes avec azoospermie et SCO ainsi que ceux d’hommes avec spermatogenèse normale. Les miRNAs ont été isolés avec la trousse de Purification miRCURY™ RNA. Le système miRCURY LNA™ Universal RT a été utilisé pour la détection quantitative de miARNs par PCR en temps réel. La localisation des miARNs a été réalisée par hybridation in situ (HIS) sur des tissus fixés au formol et inclus en paraffine en utilisant la technologie miRCURY LNA™ microRNA ISH. Les analyses statistiques ont été faites avec GenEx V5.0.
Résultats: L’expression des microARNs a été faite chez 13 hommes féconds et 5 hommes avec un diagnostic confirmé de SCO diffus. L’expression de miR-202-5p est réduite d’un facteur 17 (P < 0.00001) dans le tissu des hommes SCO par rapport au tissu des hommes à spermatogenèse normale. L’expression de miR-34c-5p est réduite d’un facteur 346 (P < 0.00001), celle de miR-10b d’un facteur 18 (P < 0.00001), celle de miR-191 d’un facteur 20 (P = 0.001) et celle de miR-126 d’un facteur 40 (P < 0.00001) dans les tissus des hommes SCO comparés à ceux des hommes à spermatogenèse normale. MiR-202-5p a été localisé par HIS dans les cellules de Sertoli des hommes à spermatogenèse normale, mais pas dans les cellules de Sertoli des hommes SCO.
Conclusions: Nombre de miARNs sont exprimés différentiellement chez les hommes féconds par rapport aux hommes SCO. MicroARN-202-5p est localisé dans les cellules de Sertoli et son expression diffère de façon marquée entre les hommes féconds et ceux dont les cellules germinales sont absentes; ceci suggère une nouvelle interaction – entre les cellules somatiques et germinales constitutives de l’épithélium séminifère – impliquée dans la régulation de l’expression des microARNs.
Keywords: Male infertility; MicroRNA; Sertoli cells; Spermatogenesis; miR-202-5p.